实验方法原理 | 抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。 |
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实验材料 |
小鼠
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试剂、试剂盒 |
小牛血清 DMEM DOX
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仪器、耗材 |
CO2培养箱 无菌钢圈
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实验步骤 |
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注意事项 |
1. 要具备培养细胞的实验室条件,谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值,以确定其实诱导浓度。 3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株,对阿霉素等产生抗性的细胞株,往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。 |
实验心得:中药和西药的剂量设计有些差别,中药最高剂量一般为200 ug/ml,西药最高剂量一般为100 ug/ml,初筛药物分子量要求在200 g/mol 以上,即10 mmol。 另外,有些药物还原性很强,可以和MTT直接反应生成结晶紫,从而出现假阳性结果。 有些药物有颜色,可以在细胞内沉积,又能被最后的溶剂溶解,有些药物在490 nm 处有紫外吸收,如果有这种情况会出现越高剂量组OD值高出空白对照组,如果药物确实有作用,会出现U字形量效曲线。