选择生长良好，含有较多即将羽化的蛹的培养瓶，清除瓶中所有成蝇。8~12小时内（8小时更可靠）从瓶中收集幼蝇，麻醉（时间不宜过长），收集的雌蝇即为处女蝇。果蝇刚孵化没有发育完全，可根据外生殖器结果分辨雌雄。处女蝇单独存放在一新的培养瓶内。反复收集，直到足够为止。一个杂交试验通常收集5~10只处女蝇即可。