自20世纪80年代起，我国胃癌发病呈下降趋势，但仍是危害人民健康的重要因素。根据卫生部卫生信息统计中心公布的资料，2001年居我国城市死因第一位的是恶性肿瘤，死亡率为135.59/10万。胃癌在全国城市肿瘤死因中居第三位。因此，胃癌的防治研究依然是我国的重大疾病攻关领域，中医药在对改善胃癌患者临床症状、提高患者生存质量等方面具有一定的优势，为进一步发展中医药防治胃癌的方法，揭示其作用机制，需要开展大量的胃癌动物实验研究。胃癌动物模型常用的有大鼠、小鼠、裸鼠、犬、雪貂、旱獭和蒙古沙土鼠等，如甲基硝基亚硝基胍(MNNG)口服给药法建立胃癌大鼠模型等，其中采用最常用的是裸鼠。裸鼠是无胸腺、T细胞免疫缺陷动物，由于NK细胞及巨噬细胞功能仍存在，故仍具一定的免疫功能，国际上常用的是BALB/c -nu/nu裸鼠。近年，也有报道应用T、B细胞联合免疫缺陷(SCID)鼠来代替裸鼠进行人胃癌移植实验。

建立人胃癌裸鼠移植模型的主要方法，按种植部位分为皮下种植法、胃壁内种植(即原位移植)法、腹腔种植法等；按移植物分为细胞悬液注射法和组织块手术种植法。目前报道较常用的是细胞株悬液皮下注射成瘤后，在鼠间反复传代，再取形成的实体瘤进行原位移植；或是将手术切下的新鲜肿瘤组织块直接种植于裸鼠胃壁内，具体方法如下：

1)细胞悬液皮下接种模型。此方法首先用体外培养的胃癌细胞株制成1×1000000～1×100000000数量级的单细胞悬液，对裸鼠进行皮下注射，每点0.1～0.2ml。常用的胃癌细胞株有SGC7901(淋巴结转移性胃腺癌)、MGC803(胃低分化黏液腺癌)、MK8(胃腺癌)、MKN28(胃中分化管状腺癌)、MKN45(胃低分化腺癌)、BGC823(胃低分化腺癌)和KOTAⅢ(胃印戒细胞癌)等各亚株。接种部位以腋窝、胸前外侧和鼠蹊部为佳，特别是腋窝部因皮肤松弛、游离空间大且血供丰富，有利于肿瘤的生长，能使瘤体长得较大，宿主寿命也获延长。皮下瘤一般于术后1～2周形成明显的肿块，至第3周肿瘤在局部大量增殖，往往形成较大的肿块，如果此时进行鼠间传代，成功率高。由于此模型的最大特点为操作简便，且肿瘤生长于皮下，容易观察。因此常用于抗癌药物的研究及胃癌组织裸鼠原位移植前的瘤块准备。

2)细胞悬液原位注射模型。该方法与皮下接种模型大致相同，只是接种部位为裸鼠腺胃浆膜层下。接种时需把握好进针深度，以免将肿瘤细胞注射入胃腔内。如接种成功，一般于术后3～4周即可在腹部皮下触及肿块，8～10周出现局部淋巴结转移。此法能持续观察移植瘤的生长、转移情况。

3)新鲜组织块原位移植模型。人胃癌新鲜组织块原位移植模型，是当前主流的建模方式。这一方法要求在无菌条件下收集新鲜胃癌组织后，立即置于含有抗生素的培养液中，并在尽可能短的时间内进行移植，以免肿瘤组织发生坏死、失活。移植部位一般选择腺胃大弯侧的浆膜层与肌层之间，此部位血供较好，肿瘤易于生长，而又不易过早地出现幽门梗阻。具体移植方式有缝挂式和囊袋式。术者首先将胃壁浆膜层剪开一2mm的小口，向浆膜层下的四周稍游离后，置入修剪好的1～2枚约2mm大小的肿瘤小粒。其中，缝挂式方法是直接将肿瘤以720的丝线缝挂于剪开的浆膜层缺损处，操作简便、快速，但术后肿瘤有脱落的可能。囊袋式方法是将肿瘤置入浆膜层缺损处后进行荷包缝合，或是充分游离浆膜，使其在局部形成一小囊，然后将瘤块置于其中，再缝合囊袋，使瘤块完全被包埋于胃壁的浆膜层与黏膜层之间。一般在术后3～4周移植瘤直径达到5～10mm。可在裸鼠腹壁上扪及。

我们对正常与SGC-7901胃癌荷瘤BALB/c-nu裸鼠的证候特征进行初步观察研究，兹叙述如下。

一、材料与方法

1．实验动物

6～7周龄雄性BALB/c-nu裸鼠30只，体重14～16g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003，SPF级饲养。

2．瘤源

SGC-7901胃癌细胞瘤株，冻存于课题组实验室-80℃冰箱。

3．主要仪器

同本章第一节中“H22肝癌荷瘤小鼠”的使用仪器。

4．造模方法

(1)SGC-7901胃癌细胞株准备

1)取体外培养传代第8日的SGC-7901胃癌细胞；

2)0.25％胰蛋白酶消化后离心收集细胞悬液，倒置显微镜下细胞计数，无菌生理盐水调整细胞密度为1.9×10000000/ml。

(2)SGC-7901胃癌裸鼠模型建立

在实验动物中心，75％乙醇常规消毒小鼠右腋部，皮下注射0.2ml细胞液(含细胞数为3.8×1000000个)。每只裸鼠接种前，充分摇匀细胞液，在30 min内接种完毕。

5．指标检测

(1)四诊指标检测

同“H22肝癌荷瘤小鼠”。于第0日、6日、14日、17日、21日、30日、40日、50日各检测1次，共8次。四诊检测和计量化辨证的具体方法参见本著第三章及所附参考文献。

(2)特殊指标检测

按照公式计算：①瘤体积＝0.5×(最长直径×最短横径2)，单位为cm3。②去瘤体重＝带瘤体重－(瘤体积×1)。

6．数据处理

同“H22肝癌荷瘤小鼠”的数据处理。

7．统计分析

采用SPSS12.0统计软件，运用方差分析，P＜0.05表示在统计上具有显著性差异。

二、实验结果

1．正常与SGC-7901胃癌裸鼠的外观

正常裸鼠体格健壮、精神饱满、双眼有神、皮肤红润有光泽、姿态自如(图4-3-1)；SGC-7901胃癌细胞在裸鼠腋下生长缓慢，接种后第6日，出瘤不明显(图4-3-2)；接种后第21日，肿瘤尚不大(图4-3-3)；至接种后第30日，气阴两虚证候显著，精神委顿、消瘦明显(图4-3-4)；至接种后第50日，一些荷瘤小鼠进入晚期，肿瘤庞大，恶液质明显，气血阴阳具虚，虚实夹杂(图4-3-5)。

 

 

2．成瘤情况

10只接种SGC-7901胃癌细胞的裸鼠，于接种后第14日全部形成肿瘤，肿瘤形成率为100％。

3．存活情况

SGC-7901胃癌组裸鼠接种后第42日，自然死亡1只，第50日仍剩余9只，最后一次四诊检测后处死(图4-3-6)。

4．去瘤体重与瘤体积

在接种2周内，SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠的肿瘤增长缓慢，而3周后肿瘤增长较快(图4-3-7、图4-3-8)。

5．脾脏大体解剖照片

接种至51日处死时，SGC-7901胃癌裸鼠的脾脏显著大于正常裸鼠(图4-3-9)

6．腋温和抓力

与正常组比较，腋温与抓力在接种第0日、第6日，检测SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠腋温与抓力差异不显著；而接种第14日起，各次荷瘤裸鼠的腋温与抓力下降有显著性差异，P＜0.05(图4-3-10、图4-3-11)。

7．旷场检测

与正常小鼠比较，第30日、第40日、第50日检测荷瘤裸鼠的旷场跨格数显著减少(P＜0.05)，而前肢离地数在第30日、第40日亦减少，P＜0.05(图4-3-12、图4-3-13)。

8．爪r值和尾r值

正常裸鼠爪、尾颜色红润，反映红色程度的r值，在不同检测日有轻微的波动。接种后第17～21日，SGC-7901胃癌组爪尾色泽变化不显著(图4-3-14、图4-3-15)。肿瘤邪毒耗血的现象不明显，与其他肿瘤有区别。

9．证候变化及程度

(1)气虚证

在肿瘤发展过程中，SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠气虚日益加重，与正常组比较，有显著性差异，P＜0.05(图4-3-16)。

(2)血虚证

在肿瘤发展过程中，SGC-7901胃癌裸鼠未出现典型的精血虚证(图4-3-17)。

(3)阴虚证

在肿瘤发展过程中，第17～50日，与正常组比较，荷瘤裸鼠阴虚程度显著，P＜0.05，阴虚证始终伴随(图4-3-18)。

(4)阳虚证

在肿瘤发展过程中，依据辨证标准，SGC-7901胃癌裸鼠未出现典型的阳虚证，但第40日、第50日，出现阳虚，与正常组比较，P＜0.05(图4-3-19)。

10．同病异证

编号S1的胃癌裸鼠相对于其他小鼠表现为气盛，然而，接种肿瘤细胞后，气虚出现，并日益显著。以后伴随阴虚的发生，且程度逐渐严重。但一直未出现血虚与阳虚(图4-3-20)。编号S7的胃癌裸鼠接种肿瘤细胞后，出现气虚，且日益显著，而阴、阳、血等充盈度在正常范围(图4-3-21)。

以上辨证结果提示，接种肿瘤细胞后荷瘤小鼠就总体而言存在证候演变的趋势，但对个体小鼠而言，证候变化趋势是有差异的。就荷瘤小鼠存在体质差异，开展辨证论治的个体化治疗是有积极意义的。

三、讨论

关于裸鼠的证候外观信息研究报道较少，可能与裸鼠的成本费高、饲养和检测环境要求严格有关。本研究在课题组以往小鼠四诊工作站基础上，尝试并观察接种肿瘤细胞后裸鼠的证候特征变化，从以上研究结果看，我们发现：

1)SGC-7901胃癌BALB/c-nu荷瘤裸鼠存在典型的证候，与人类类似，其证候会自然发生和演变，可以很好地模拟临床肿瘤患者，用于辨证论治的实验研究。而本文所采用的计量化辨证有助于荷瘤裸鼠个体化辨证论治，以及疾病和辨证论治客观化、计量化的疗效评价。

2)关于SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠肿瘤的生长速度缓慢，其原因可能与该肿瘤细胞株增生不活跃有关。可能是其肿瘤增长缓慢，有较长的带瘤生存时间，因而与不同肝癌荷瘤小鼠相比，阴虚、阳虚等证出现得晚、程度轻。可以推测，其证候持续时间长，具有较为理想的治疗时间窗，似可作为辨证论治的理想模式生物。