B6-hPD1/hCTLA4

品系名称：B6/JGpt-Pdcd1 ^{em1Cin(hPDCD1)}Ctla4 ^{em1Cin(hCTLA4)}/Gpt

品系类型：Knock-in

品系编号：T003826

背景：C57BL/6JGpt

品系描述

PDCD1(Programmed cell death 1)即程序性细胞死亡受体1，免疫球蛋白超家族I型跨膜糖蛋白，是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员。以PD1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植排斥反应等均有重要的意义。

大量研究证实，肿瘤微环境中的肿瘤细胞表面PDL1增高，同时与活化的T细胞上的PD1 结合，传递负调控信号，导致肿瘤抗原特异性T细胞的凋亡或免疫失能，从而抑制免疫反应，进而促使肿瘤细胞的免疫逃逸^[1]。用抗体阻断PD1/PDL1信号通路已成为肿瘤免疫治疗的经典方法。

细胞毒T淋巴细胞抗原4（CTLA4）又名CD152， 是由CTLA4基因编码的一种白细胞分化抗原，属于免疫球蛋白超家族。T细胞中主要表达CTLA4的细胞为调节性T细胞（Treg），一类可以负向调节细胞免疫的T细胞。目前认为CTLA4的功能为控制Treg定位。CTLA4的胞外区能够与CD28竞争性的结合APC表面的B7分子配体（CD80/CD86），产生抑制信号，抑制T细胞激活，使肿瘤细胞免受T淋巴细胞攻击。因此阻断CTLA4的免疫效应可刺激免疫细胞大量增殖，从而诱导或增强抗肿瘤免疫反应^[2-3]。

集萃药康采用基因编辑技术，将C57BL/6小鼠的Pdcd1胞外区替换为相应的人源基因片段，将小鼠Ctla4基因编码胞外区的部分替换为对应的人源基因序列，而胞内区则保留完整的鼠源序列，自主研发了B6-hPD1/hCTLA4人源化小鼠模型。该模型可用于人类 PD1 抑制剂、CTLA4抑制剂以及两者联用的药效评价及安全性评价。

品系策略

应用领域

1.人CTLA4抑制剂药效评价或人PD1抑制剂；

2.人CTLA4抑制剂及人PD1 抑制剂联合用药药效；

3.人CTLA4抑制剂及人PD1抑制剂毒理学评价；

4.抗肿瘤研究；

5.自身免疫病研究。

验证数据

1.T/B/NK细胞比例检测

图1 B6-hPD1/hCTLA4小鼠T/B/NK细胞比例检测。野生型小鼠与B6-hPD1/hCTLA4纯合子小鼠在外周血及脾脏中的T/B/NK细胞比例接近。

2.体内药效验证

在B6-hPD1/hCTLA4小鼠模型皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人CTLA4抗体YERVOY^®（Ipilimumab)及抗人PD1抗体KEYTRUDA^®（Pembrolizumab）的肿瘤抑制药效

A

B

图2 基于B6-hPD1/hCTLA4的体内药效试验。

将对数生长期的结肠癌细胞MC38接种至6-8周龄的B6-hPD1/hCTLA4皮下，待肿瘤生长至平均体积约100mm3时随机分为Control（对照组，n=5），Ipilimumab 0.2mg/kg组（n=5），Opdivo 0.5mg/kg组（n=5），Ipilimumab 0.2mg/kg + Opdivo 0.5mg/kg组（联合用药组，n=5）, 使用相应药物进行治疗,每3天给药1次，共给药6次。

结果显示： Ipilimumab 0.2mg/kg组可部分抑制肿瘤生长（D30: TGI=68.4%），Opdivo 0.5mg/kg组也可部分抑制肿瘤生长（D30: TGI=41.9%），而Ipilimumab与Opdivo联合用药对肿瘤生长抑制效果最明显（D30:TGI=81.0%）（图A）。四组小鼠体重无明显明显差异（图B）。数据以Mean ±SEM形式呈现。

结果证明：B6-hPD1/hCTLA4双人源化小鼠是评估anti-hCTLA4和anti-hPD1抗体体内联合药效的理想动物模型。