油红O染色
正常情况下,除脂肪细胞外其它细胞内一般不见或仅见少量脂滴。在病理状态下如果细胞(特别是在心、肝、肾等实质器官发生脂肪变性)中出现脂滴或脂滴明显增多时,包浆内会出现大小不一的空泡。这时需要鉴别空泡性质,可以用脂肪染色来区分是脂肪变性还是水样变性或糖原贮留。
油红O属于偶氮染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,与甘油三酯结合呈小脂滴状。脂溶性染料能溶于组织和细胞中的脂类,它在脂类中的溶解度比在溶剂中大。当组织切片置入染色液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈橘红色。
1. 试剂
0.5%油红O溶液:油红O 0.5 g 溶于100 ml异丙醇中。
2. 操作步骤
(1)取新鲜的组织制成冰冻切片,切片厚度0.5-10 um;
(2)将切片固定于10%甲醛固定液中固定5-10 min;
(3)蒸馏水洗;
(4)用60%异丙醇漂洗一次,20-30 s,
(5)切片浸入0.5%油红O染色液中染色10-15 min;
(6)再用60%异丙醇分化3-5 是;
(7)水洗1-2 min;
(8)用苏木素复染细胞核1-1.5 min;
(9)水洗返蓝,稍待干;
(10)用甘油或明胶封片,镜检观察。
结果:脂质呈红色,细胞核呈淡蓝色。
3. 注意事项
(1)由于脂肪易溶于有机溶剂,所以一般用冰冻切片染色来显示;
(2)制作脂肪染色的冰冻切片不能太薄,过薄的切片常会使脂质丢失;
(3)苏木素复染时间不能过长;
(4)染色结果不能长期保存,应尽快观察及照相。
4. 应用
(1)在动脉粥样硬化时,内皮细胞下的脂质沉着,用脂肪染色能将脂质清晰地显示出来;
(2)由脂肪组织病变所引起的脂肪栓塞可用脂肪染色显示栓子内的脂质,从而确诊脂肪栓塞;
(3)用于肿瘤组织的鉴别诊断,由脂肪组织所发生的肿瘤在与其它组织来源的肿瘤相区分时,可以借助脂肪染色,脂肪组织所发生的肿瘤,脂肪染色为阳性。
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