手术区域的检查
引言
对AWAR管辖的所有动物种，AWAR要求IACUC检查所有研究用动物设施。PHS政策要求所有动物设施(包括辅助设施和手术领域)和相关区域都要进行至少每6个月1次的检查。PHS政策同样要求依照《指南》(第9页)推荐的内容，动物设施和手术区域至少每6个月要做1次检查。《指南》和AWAR明确规定了对啮齿类动物和农业部涉及到的物种实施生存性手术时使用的手术设施和方法。IACUC必须审查所有与动物相关的手术方法，以确保经过适当训练的个人能够以人道的方法进行研究。本章旨在帮助读者遵守这些规章和法则。
26.1 每次检查时，IACUC是否会视察并评估所有手术地点?
法规要求
对农业部管辖的物种[1]，不管手术地点是否在动物设施[2]范围内，联邦政府要求IACUC检查进行生存性手术的区域。AWAR规定，动物设施，包括其科研区域要进行至少每6个月1次的检查。
PHS政策(Ⅳ，B，2)同样要求所有动物设施都要进行至少每6个月1次的检查。需要注意的是，PHS政策(Ⅲ，B)涵盖“所有建筑、房间、区域、围墙；运输工具(包括辅助设施)；动物装载容器、运输工具、维修工具、动物饲养和手术操作等”。另外，PHS政策(Ⅳ，B，1)也要求依照《指南》中“委员会应审查动物管理计划并对动物设施和活动区域进行每至少6个月1次的检查”这项条款执行。
观点
AWAR(§2.31，c，2)和PHS政策(Ⅳ，B，2)要求手术区域每半年检查一次，因此所有的手术区域，包括在动物设施核心之外的手术设施，每半年将会南IACUC检查一次。以保证服从AWAR、PHS政策和《指南》，并与AWAR、PHS政策和《指南》的精神保持一致。AWAR(§2.31，d，1，Ⅳ；§2.31，d，l，V)和《指南》(第60～64页，78～79页)都详细规定了对啮齿类动物和农业部涵盖的物种实施生存性手术时使用的设施和方法。
调查
在每次半年检查中，你单位的IACUC会视察并评估所有的手术地点吗?(可多选)
● 不适用，因为我们不做任何手术 15/153
● 对农业部涵盖的物种的生存性手术，我们都会检查手术地点 106/153
● 检查所有啮齿类动物和非生存性手术的地点 113/153
● 不检查啮齿类动物和非生存性手术的地点 3/153
● 其他——虽然检查手术地点，但不是每次都检查 2/153
26.2 手术地点评估的最小频率是多少?
法规要求
参见26.1。
观点
参见26.1。
26.3 对非啮齿类动物和啮齿类动物实施生存性手术时需要哪些设施?
法规要求
在评估用于生存性手术的设施时，因为设施是根据实施的手术方法来配置的，所以IACUC必须区分主要和次要手术方法(参见26.5中的定义)。
AWAR(§2.31，d，1，ix；§2.31，d，1，x)和《指南》(第78～79页)都明确规定了对非啮齿类动物实施主要手术的要求。AWAR(§2.31，d，1，Xi)要求“非啮齿类动物的主要手术只能在非啮齿类动物手术专用设施中进行，而且必须在无菌条件下操作并维持”。AWAR没有规定野外进行主要手术时必须有专用设施，但要求一定要使用无菌技术(§2.31，d，1，ix)。
《指南》(第78～79页)提出了与设施相关的更多要求。建议非啮齿类动物手术设施中各种功能性区域通常由物理屏障隔离开，但紧急情况除外。这些功能性区域包括手术支持区、动物准备区、外科医生消毒区、手术室和术后恢复区。这些区域的大小取决于手术项目的大小和范围。关于通风，《指南》(第76页)要求“手术区域必须在正压条件下保持空气洁净”。
观点
对于大多数手术设施的最低要求，作者的观点为：
● 动物准备区
● 外科医生消毒区
● 手术室
手术设施必须在控制微生物污染的基础上设计和运行。我们可通过下列条件控制微生物污染：
● 最小化该区域的交通量
● 严格遵守公共卫生和消毒程序
● 限制手术室内设备，仅使用可移动的基础设备(如手术台、麻醉机和麻醉监护仪)
● 手术设施的全套设备要包含通风系统。在动物准备时，手术室能保持正压通风和环境清洁(在绝大多数情况下)
非啮齿类动物的次要手术或啮齿类动物的主要手术对设施的要求不是很严格。AWAR(§2.31，d，l，iX)没有规定这些手术的专用设备，但明确说明要使用无菌技术。用于这些手术的区域可以是单独的房间或一间房间的一部分，这样消毒工作更加简单而且为手术专用。实验台或手术台不仅在使用前后都需要充分消毒，还应放置于无风处，周围无辅助设备且需要保持合适的温度。
26.4对动物实施非生存性手术时需要哪些设施?
观点
非生存性手术对设施没有特殊要求，但非生存性手术使用的区域应为单独的房间或一间房间的一部分。该区域手术时消毒方便且为手术专用。实验台或手术台不仅在使用前后都需要充分消毒，还应放置在无风处，周围无辅助设备且需要保持合适的温度。一般来说不需要无菌操作，手术地点必须消毒，手术器械要干净，而且外科医生要戴手套。IACUC应评估非生存性手术的时程，避免因手术时间偶尔过长导致动物的败血症。在上述情况下，建议进行无菌操作。此外，如果要进行某些手术(如器官移植手术)，IACUC会评价是否需要无菌技术或无菌设备(参见18.15)。
26.5 如何区分大手术(方法)和小手术(方法)?
法规要求
AWAR(§1.1)定义大手术(方法)为“穿透或暴露体腔的或任何对机体、生理功能造成永久性损伤的手术(方法)”(参见18.4)。，
PHS政策本身没有提供大手术方法和小手术方法的具体定义，但对于PHS政策Ⅱ中涉及的物种，要求遵守AWA和《指南》(PHS政策Ⅳ，B，1)的相关规定。
《指南》(第6卜62页)定义大手术(方法)为“穿透或暴露体腔的或对机体和生理功能产生实质性损伤的手术(方法)”。定义小手术(方法)为“不暴露体腔的且对机体功能造成较小或没有影响的手术方法”。
观点
尽管AWAR和《指南》都提供了大手术(方法)的定义，但一些方法的分类依然需要IACUC根据这些方法的拓展、结果和潜在的并发症而做出干预。大手术(方法)包括腹部切开术、胸廓切开术、颅骨切开术和截肢。小手术方法包括伤口缝合、外周血管捅管和某些对特定的家畜例行手术方法。
26.6 对AWAR和PHS政策管辖的某种动物。什么情况下能在非IACUC规定的专用手术设施中进行大手术?
法规要求
AWAR(§2.31，d，1，iX)要求“非啮齿类动物的大手术只能在专用设施中进行，手术的操作和维持都必须为无菌条件”。AWAR(§2.3l，d，1，iX)没有规定野外研究中大手术必须在专用设施中进行，但依然要求无菌操作。
PHS政策(Ⅳ，B，1)要求依照《指南》(第62页)中“一般来说，除非被判定为研究方案的重要组成部分并有IACUC的批准，否则非啮齿类动物的无菌手术只能在专用设施内进行”的内容执行。尽管如此，《指南》(第62-63页)也提出了紧急情况和野外研究时的例外情况，“在紧急情况下，尽管达不到理想条件，但也要立即进行手术矫正’’和“通常，农场动物的医学生物研究手术不仅要有一定的方法，而且应按该章节的指导方针采用相关设备。然而，相对于生物医学研究的实验性外科手术，一些小的紧急手术通常在普通的诊所中由兽医完成，而有些商业性的农业手术是在更不严格的条件下进行的”。
观点
作者的观点与《指南》类似，经科学的判断(如实验室的特殊仪器)和IACUC批准，可以在非专用手术设施内进行主要手术。在紧急情况下，若动物不能被运送到专用手术室，就应被看成是临床医疗需求，应由兽医的临床判断来决定，而不需要通过IACUC的批准。
调查
什么情况下你单位的IACUC允许在非IACUC规定的专用手术设施条件下进行大的生存性手术?(可多选)
● 不适用，因为我们不做任何手术 15/153
● 对此没有任何政策 18/153
● 对啮齿类动物允许，不需特殊理由 26/153
● 对啮齿类动物允许，需有特殊理由 39/153
● 对非啮齿类动物允许，不需特殊理由 0/153
● 对非啮齿类动物允许，需有特殊理由 12/153
● 野外研究条件下允许 11/153
● 任何条件下都不允许 27/153
26.7 在非啮齿类动物的生存性手术专用设施中能进行非啮齿类动物的非生存性手术或啮齿类动物的生存性手术吗?如果可以，需要遵循哪些特殊步骤?
观点
若为下面的任意一种情况，IACUC可能允许在生存性手术设施中进行啮齿类动物生存性手术或非生存性手术：
● 按照《指南》(第62页)的相关标准，实施的非生存性手术采用与生存性手术相同的标准。
● 在进行非啮齿类动物生存性手术之前手术室已彻底消毒(《指南》第62页)。
26.8 对手术区域检查和评估过程中，IACUC重点检查哪些区域和问题?
法规要求
PHS政策(Ⅳ，B，2)要求只要是PHS政策(Ⅲ，B)中定义的任何动物设施，都要进行至少每6个月1次的检查，包括“所有建筑、房间、区域、围墙；运输工具(包括辅助设施)；动物装载容器、运输工具、维修工具、动物饲养和手术操作等”。PHS政策(Ⅳ，B，1)要求遵守《指南》(第61～66页)的相关内容。这些内容包含了IACUC 对无菌操作方法的评估、术后恢复和护理的评估、麻醉监护及其他内容的评估。《指南》的其他部分包括了更多关于职业健康与安全(《指南》(第14～18页)、设计无菌操作设施(《指南》第78～79页)和其他方面的信息。AWAR(§2.32)、PHS政策(Ⅳ，c，1，f)、《原则Ⅶ》及《指南》(第61页)都要求与动物工作相关的个人具有良好的素质和经验(参见26.1)。
观点
AWAR(§2.31，d，1，ix；§2.31，d，l，x)和《指南》(第60～64页，78§79页)规定了对非啮齿类动物实施生存性手术时设施和方法的要求。
在作者看来，评估手术区域的最低标准应包括如下方面：
● 对个人训练的评估
● 遵守无菌操作
● 未过期药品的合理使用
● 残余麻醉剂的清理
● 术前监护及护理时设备和方法的合理使用
● 术前记录的保存
● 紧急情况下能提供正确的设备和药物
● 尖锐器械的合理处置
调查
在手术区域检查和评估的过程中，。IACUC会特别注意哪些区域和问题?(可多选)
● 不适用，因为我们不做任何手术 22/153
● 一般的物理设备 107/153
● 个人训练和外科医生的能力 45/153
● 残余麻醉剂的清理 83/153
● 吸人麻醉机麻醉记录的保存 64/153
● 不适用，因为我们不用吸入麻醉机 7/153
● 手术套房内的交通模式 35/153
● 紧急情况下能提供正确的设备和药物 59/153
● 过期药物 103/153
● 麻醉剂的储备和库存控制 101/153
● 手术室的清洁和易于消毒性 112/153
● 消毒方法和记录 59/153
● 仪器和手术用品消毒的一般程序 81/153
● 仪器消毒的日期记录 46/153
● 保证高温蒸汽灭菌设备能达到适当的灭菌参数 55/153
● 遵守无菌操作规范，包括手术衣的合理使用 70/153
● 张贴紧急电话号码 62/153
● 术后恢复设施 8l/153
● 术前护理的设备和方法 64/153
● 术前监护和记录 60/153
26.9 对于评估26.8中的内容有哪些可用的参考资料?
观点
IACUC应利用AWAR、《指南》、国家相关规定和机构政策来为手术设备和相关手术制定可接受的标准。IACUC也可通过参考资料或咨询专家，以帮助制定实施手术的相关标准。其他参考资料包括：兽医和人医手术及麻醉资料、实验手术资料、良好实验
室操作规范[3]、职业安全与健康法[4]、血源性病原体标准[5]、辐射防护标准[6]、实验室安全标准[7]、有关管制物品法[8]的相关信息、DNA重组手册[9]、CDC出版的《微生物和生物医学实验室的生物安全》[10]，还有消毒和卫生控制的参考资料[11]。
26.10 检查非啮齿类动物和啮齿类动物手术区域时，监察小组人员应检查哪些记录?
观点
IACUC需确认，在被批准的动物护理和使用方案中包括精确描述的手术方法、员工培训、员工经验和素质。IACUC应审查如下动物健康和实验记录相关内容：
● 捕述即将进行的手术方法的术前记录
● 实验机构管理
● 麻醉剂量、方法及麻醉管理
● 术中监护程序的频率和类型
● 术后监护和观察
● 材料消毒的质量保障记录(之前提到过)
● 不论是与动物在一起还是在手术设施中，或在研究者手中，所有的记录都必须能供IACUC查看。
调查
在检查手术区域时，IACUC会检查记录吗?
● 不适用，因为我们没有手术区域 23/153
● 在检查过程中会定期检查记录 48/153
● 在检查过程中会不定期检查记录 74/153
● 无回答 8/153
目前检查频率最高的是APHS／AC涵盖的非啮齿类动物和最近发病病例的记录。
26.11 手术和术后记录需要多详细?一份充分的记录有哪些基本组成部分?
法规要求
《指南》要求“动物个体的临床记录是有价值的，特别是犬、猫、非人灵长类动物还有农场牲畜的记录。手术记录应包含临床诊断的相关信息，手术史、术后护理和实验用信息”。AWAR(§2.33，b，5)要求“按照最近新发布的兽医医疗和护理程序，应有充足的术前和术后护理”。APHIS动物管理政策3(APHIS Aminal Care PoIicy 3)指出“健康记录旨在为涉及动物护理的人们保存必要的信息。我们期待着各设施都能有一套全面、充分提供医疗护理的系统[12]”
在生物医疗和行为研究中，HREA(Section 495，a，2，B)要求“动物要有适当的术前和术后兽医医疗和护理”(参见18.31：18.32)。
观点
作者认为，“AWAR和HREA可以解释为手术记录是兽医护理的必要组成部分。手术记录应详细并包括所有相关信息，而且不仅仅局限于以下内容：
● 动物鉴别
● 计划说明
● 手术方法的详细表述
● 实验机构管理
● 麻醉剂量、方法及麻醉管理
● 术中监护程序的频率(如时间间隔)和类型(如血压、心率)
● 术后监护和观察记录
● 术后治疗管理
调查1
你单位的IACUC是否要求有详细的手术和术后记录?
● 不适用 29/153
● 需要详细的记录 58/153
● 不需要详细的记录 23/153
● 仅农业部涵盖的动物需要详细的记录 32/153
● 其他——随手术方法不同而变化 2/153
● 无回答 9/153
调查2
你单位的IACUC或动物设施会强调使用特殊形式的文档为视察员展示手术信息么?
● 不适用 28/153
● 是的 64/153
● 不是 53/153
● 无回应 8/153
26.12 所有动物种类都应留存手术记录还是仅限于某些种动物?
观点
《指南》(第46页)指出，动物个体的临床记录也是有价值的，特别是对犬、猫、非人灵长类动物还有农场牲畜的记录。尽管AWAR或PHS政策都没有具体要求要有记录，但按照发布的兽医医疗实践和AWAR(§2.33，b，5)解释来看，APHIS/AC检查者希望有记录并能留存下去。PHS政策同样规定，对于PHS政策Ⅱ中涉及的动物品种要遵守AWAR和《指南》(PHS政策Ⅳ，B，1)的要求。
作者认为，所有动物品种都必须留存手术记录，这样才能为受过适当培训的操作人员以人道的方法进行动物实验提供文献参考(参见18.30～18.32)。
调查
你单位要求哪些动物品种有手术记录?
● 不适用，因为我们不做任何手术 19/153
● 没有关于手术记录的政策要求 32/153
● 农业部涵盖的动物品种和非啮齿类动物 42/153
● 所有动物品种，包括啮齿类动物 60/153
26.13 应该以动物个体为单位保存手术记录还是以整体为单位保存?
观点
对每个动物个体来说，没有规定要有手术记录。《指南》(第46～47页)注明，个体动物的临床记录可能有价值，而且这些记录应包含手术史和术后护理的内容。作者的观点是，啮齿类动物的记录可以以整体为单位保存，但非啮齿类动物的记录应以个体为单位保存(参见26.10；27.16)。
26.14 生存性手术的手术记录与非生存性手术的手术记录有何不同?
观点
AWAR和《指南》都没有规定非生存性手术的手术记录比生存性手术的手术记录不严格或有什么不同。手术记录的保存应遵守26.10和26.12 中提到的兽医医疗标准。(参见18.30～18.32)
调查
生存性手术与非生存性手术相比，两者的手术记录要求有什么不同?
● 不适用 30/153
● 我们没有政策规定这种类型的要求 36/153
● 非生存性手术没有记录保存 17/153
● 对于所有动物或某些物种，对生存性手术重要的内容，如麻醉、药量和监护都有记录保存 61/153
● 生存性手术和非生存性手术的记录没有区别 6/153
● 无回应 3/153
26.15 啮齿类动物的手术要求记录哪些指标?
法规要求
《指南》(第46页)陈述，动物的临床记录是很有价值的，而且这种描述性的信息应能保存并维持。这些声明和陈述中也包括啮齿类动物。
观点
在作者单位，尽管对监测频率和术中监测方法的细节都没有要求，但仍需要记录啮齿类动物的手术。另外，应以动物整体为单位保存记录。啮齿类动物的记录应包括以下方面：
● 具体描述实施的手术方法
● 实验机构管理
● 麻醉剂量、方法及麻醉管理
● 术后监护和观察
● 术后恢复期间的治疗管理
26.16 若监察小组在手术区域发现违规项目，应如何继续下一步的工作?
法规要求
IACUC应按AWAR(§2.33，c、3)和PHS政策(Ⅳ，B，3)中的具体规定，确定该项目属重大或轻微违规项目，并设定一个整改时间表(参见25.12)。
观点
对相关人员的接触依项目的大小而定。IACUC需通知以下内容：
● 在检查时明确告知实验室负责人或之后电话告知
● 给负责人发送一份检查报告复印件
● 发送正式信件，告知相关违规项目
所有的交流应包括预期的解决日期。IACUC可根据违规项目的严重性和重复性加强对研究人员的制裁。制裁包括使用来自IO的训斥信、暂时或永久性终止其研究、强制性培训或提高检查频率。为了确认已经得到整改，IACUC可能在下一次现场检查之前复查该区域(参见25.12和第29章)。
调查
你单位的IACUC在手术区域发现违规项目时会如何继续下一步的工作?(可多选)
● 不适用 30/153
● 写信告知负责人(包括电子邮件) 94/153
● 电话通知研究人员 36/153
● 要求在具体时限内纠正错误 93/153
● 对于违规项目提供一份书面说明 93/153
● 通常通过二次检查确保项目错误已经修正 50/153
● 视情况而定，取决于违规项目的违规程度和项目重要性 59/153
● 截至目前没有在手术区域发现违规项目 5/153
26.17 大量同种或异种非啮齿类动物的、相互无关的大手术能同时在同一手术室进行吗?对于啮齿类动物又如何处理?
观点
对于相同或不同物种、在一个手术室内同时进行多个手术的情况，AWAR和《指南》都没有限制。但有些特殊情况(如种内或种间移植手术)下进行手术时，在一间手术室内允许有多只动物。
因为潜在传染病病原体的传播和不同种动物行为习性的差异，所以作者不建议同时进行多种动物的生存性手术，除非这几种动物的微生物携带状态相似，如无特定病原的啮齿类动物(SPF级动物)。作者允许同时进行大量同种动物的生存性手术，因为每个手术的本质并不使其他动物在风险增加的情况下进行手术(如动物不同的微生物状态或传染性疾病的研究)。
26.18 非啮齿类动物生存性手术和非生存性手术能同时在同一手术室进行吗？
观点
如26.17所述，只要说出理由，生存性手术和非生存性手术可以同时在同一间手术室进行。然而，如果是生存性手术，那么所有手术都应在无菌条件下进行。我们必须严格遵守无菌技术，不仅是为了遵守规章制度，也是为了防止在手术过程中可能出现高风险的败血症。
26.19 对于实施生存性手术的个人，IACUC应有何种程度的培训?IACUC是否应检查操作者有足够的培训和经验去实施大手术?
法规要求
IACUC有保障个人不论使用何种动物都有足够能力成功进行手术的义务。AWARf§2.32)和PHS政策(Ⅳ，c，1，f)都要求，凡是与动物护理、治疗和使用相关的所有人员都应有良好的素质，从而能履行自己的职责。《原则Ⅷ》规定“研究人员和其他个人都应有良好的素质而且经历过活体动物手术”。除实施手术外，与手术相关的人员都应有管理、监测麻醉和提供合理术后护理的能力。
观点
尽管IACUC的职责是明确的，但PHS政策和AWAR都没有描述具体的实施方案。委员会能够使用一系列的机制来行使和完成他们的职责(参见第2l章)。IACUC是通过重复下面的方法储存信息的：IACUC通过向研究人提出要求，在他们提交给IACUC的初步建议中包含他们培训和能力的相关信息。
因为不是所有人员都有能力开展具体的项目，所以IACUC必须保证至少有一个人有足够的能力来完成整个项目。当然，因为研究或培训中进行的手术种类和范围的设置差别很大，这就要求IACUC在具体问题具体分析的基础上做出决策。IACUC可能会要求提供附加信息或邀请研究人员与他们会谈，来检查他们的经验和培训程度。
在很多机构中，动物资源计划人员有责任监督集中化的手术设施。委员会经常依靠动物资源计划兽医或辅助专职人员提供个人培训和能力的监督信息。另外，委员会也可能要求内部的一个或几个成员在项目全部通过之前监督某些选中动物的手术。在项目开始之前必须保证充分的培训，但项目开始后接下来的评估也很重要。不太常用的方法是委员会聘请顾问评估项目的敏感性和专业化人员的素质。
26.20 在啮齿类动物的大手术方案中，无菌技术的要求是什么?
法规要求
AWAR(§2.31，d，l，iX)和《指南》(第60～64页)都要求所有动物的大手术都必须采用无菌技术。
观点
无菌技术通过排除、消除或杀灭微生物病原体，从而达到防止活组织和手术材料被微生物感染的目的。在某些方面，无菌技术对操作的要求很严格。实验台或手术台应保持清洁、消毒完毕且无辅助设备。放置在手术区域的设备或仪器(如动物保定设备、检测仪、立体定位设备)也应消毒。这些做法都能减少或消灭潜在的病原体以及它们赖以生存的条件[13、14]。
对非啮齿类动物，与手术准备相关的规章制度比啮齿类动物更加严格。外科医生和助手必须身着洁净或一次性的实验室服或手术服，戴口罩(为了防止术者的唾液飞沫污染手术伤口)和手术帽(长发人员的头发很容易落人手术区域)。外科医生应用消毒剂洗手并以能维持无菌的方法带上无菌手套[16]。
手术部位的准备包括剪毛或用除毛剂脱毛，之后皮肤用适当的消毒剂消毒，无菌创巾覆盖手术部位。无菌技术的目的是防止手术、手术部位和所有的手术器械和设备造成感染和继发性疾病(参见18.12～18.18)[15]。
26.21 若对大量啮齿类动物进行大手术，一套手术器械能用于多只动物吗?(参见18.14)
观点
啮齿类动物群体手术通常在一次会诊中完成。一定不要让一只动物污染另一只动物。手术会诊时通常使用消毒器械。需要戴消毒手套，最好能给各动物课题提供单独的消毒器械。若只有有限的手术器械且无法区分无菌手术包的情况下，应该考虑以下几种
选择：
● 使用两套器械。一套用于皮肤的切割和操作。因为皮肤表面有菌群存在，所以被认为是最可能感染的部位。一旦皮肤切开的操作完成，这些器械应放到一边而且再次消毒之前不能使用。另一套器械(共用的)应在使用后用无菌生理盐水冲洗再用于另一只动物。当选择这种方案时，一定要避免用手指接触组织，以保持手套的无菌性。
● 在动物之间交替使用的手术器械使用玻璃珠灭菌器灭菌。要注意手术器械只有前端灭菌，故不要用器械的柄或其他未灭菌的部分接触组织。因为未灭菌的柄与手套接触，故也禁止用手指接触组织。
● 有两套或两套以上手术器械的情况下，要求被污染的那套器械可浸泡于凉的消毒水中，最短需要15min即可杀灭病原微生物并能再次使用。
彭 云 赵德明 译 刘云波 孙德明 校
