脑组织在急性缺血、缺氧性损伤，尤其是急性CO中毒后的一段时间(几天)里，表现出正常或接近正常的“假愈期”，随后突然再次出现一组以痴呆为主的神经精神症状，称为迟发性脑病，主要由急性CO中毒引起。

1 大鼠急性一氧化碳中毒迟发性脑病模型(Model of delayed encephalopathy by acute CO poisoning in rats)

(1)复制方法  雄性SD大鼠，体重为240～280g，实验前一天禁食。

1)制备染毒模型  采用腹腔注射纯品CO气体，制备大鼠染毒模型。先采用改良寇氏法确定单次腹腔注射染毒半数致死量，以略低于半数致死量剂量为首次注射剂量，确定该剂量下染毒大鼠体内CO的半排出期后，于到达半排出期终点前重复腹腔注射，但剂量为首剂量的一半。具体方法为：于首次注射CO 120mg/kg体重后，连续3次按首次剂量的半量(60ml/kg体重)作追加注射，间隔为4h；间隔注射 CO后，血中HbCO(Carboxyhemoglobin)浓度可维持在50％以上达16h。动态监测大鼠尾静脉血水平，维持染毒大鼠重度中毒状态(HbCO>50％)16h以上。观察染毒后大鼠的症状及体征。对照组注射等剂量空气。

2)CO中毒大鼠染毒程度检测

①血HbCO浓度测定  采用尾尖采血改良双波长 HbCO定量法监测各组大鼠血HbCO浓度。取大鼠尾血0.1ml)加0.4mol/L氢氧化铵20ml，混匀，加20mg低亚硫酸钠混匀；10min内于535nm及578nm波长下测定其吸光度，按照下列公式计算HbCO含量。

HbCO(％)＝(2.44×A535/A578－2.68)×100％

②血中丙二醛(MDA)浓度测定  采用改良硫代巴比妥酸(FGB)荧光法，分别于CO注射前及注射后30min及1、2、4h，取染毒大鼠用乙醚麻醉，颈静脉取血测定MDA浓度，观察机体氧化损伤状况。

③病理组织学检查  分别于注射CO后的不同时间点麻醉动物后，于左心室快速灌注150ml生理盐水，再灌注4％的多聚甲醛直至尸体完全僵硬。取脑组织常规制备石蜡切片。

(2)模型特点  大鼠腹腔注射CO后，中毒症状明显，5～10min后出现烦躁、撞笼，15min后陆续出现少动、四肢瘫软、抽搐、昏迷，黏膜及肢端皮肤呈樱桃红色，部分发生角弓反张。动物血压下降至注射前水平的一半左右，血HbCO水平始终低于5％，血中MDA浓度急剧升高。染毒动物在注射CO 1、3h，脑组织出现明显水肿，皮层发生局灶性变性坏死。染毒后3、7、14、21d，基底结区核团发生局灶性变性坏死，海马细胞层有变性坏死发生，两者均以7、14d时最严重。大鼠染毒后7～21d，大脑白质局部出现脱髓鞘变，并出现明显细胞凋亡。海马细胞凋亡较轻，凋亡现象并非仅仅局限于神经细胞，白质中的小血管内皮细胞凋亡也十分明显。

(3)比较医学  采用腹腔注射途径染毒虽与临床所见急性CO中毒的CO侵入途径不同，但中毒机制相符，此方法制备的动物模型可满足CO吸入中毒模型具备的条件。流行病学调查曾显示，长时间昏迷是迟发性脑病的重要高危因素之一。该方法以4h为间隔，用腹腔注射法进行CO染毒，可使大鼠血中HbCO长时间(>16h)维持在高水平(>50％)状态，染毒大鼠昏迷时间亦较长，十分类似临床上重症CO中毒病情经过，故此种模型可望为CO中毒迟发性脑病的研究提供最接近真实的条件。此外，注射法还具有以下优点：操作简便，所需CO量明显减少，费用低廉，对设备仪器条件亦无特殊要求，染毒剂量容易控制，影响因素少，便于及时监控染毒动物血中HbCO水平，并可避免吸入染毒可能出现的缺氧因素对实验结果的影响，分次注射法更有利于维持较长时间重度CO中毒状态，从而为研究CO中毒迟发性脑病创造了有利条件。

2 兔急性一氧化碳中毒迟发性脑病模型(Model of delayed encephalopathy by acute CO poisoning in rabbits)

本实验也可选用体重为2.0～2.5kg的家兔。染毒模型的制备与大鼠相同，但注射CO的量不同。首次经腹腔注射 CO的量为200mg/kg体重，以后按6h间隔追加注射3次，剂量为100mg/kg体重。其余观察指标和模型特点与大鼠相似。