(1)复制方法  成年雌性BALB/c小鼠，SPF级，禁食不禁水24h，轻度麻醉后用套接了小号导尿管的1ml注射器抽吸含2mg三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonicacid，TNBS)的50％乙醇溶液，从肛门处将导尿管缓慢插入约3.5cm，然后将药液缓慢注入，停20s后抽出导尿管，再将小鼠倒悬约30s后放入盒中，连续7d，第8日将其处死，分离结肠，沿肠系膜缘剪外肠腔，生理盐水冲洗粪便，肉眼大体观察肠壁黏膜，留取结肠标本，行病理组织学检查。成年雌性SD大鼠，禁食不禁水24h，麻醉后将一直径2.0mm，长约15cm的橡胶输液管，由肛门轻缓插入8cm，用注射器推入含30mg TNBS的50％乙醇溶液0.85ml，待其自然清醒后自由饮食，每日观察大鼠神态活动、食欲体重、大便性状等情况；于灌肠后8周内的不同时间处死动物，取肛门至回盲部结肠，沿肠系膜纵行剖开，观察大体形态改变；同时，分别在距肛门1cm、3cm、8cm，及横结肠、升结肠和炎症严重或溃疡处各取组织标本(2mm×10mm)1块，行组织形态学检查；另定量摘取远端结肠组织1块，作中性粒细胞髓过氧化物酶(MP0)活性测定。大体形态表现(粘连、溃疡形成及炎症)和组织学损伤(溃疡、炎症、肉芽肿、病变深度、纤维化)可按下列标准平分。大体形态表现评分标准：①粘连：无：0分；轻度(结肠与其他组织剥离较易)：1分，重度：2分。②溃疡形成及炎症：无：0分；局部充血但无溃疡：1分；1处溃疡不伴充血或肠壁增厚：2分；1处溃疡伴炎症：3分；>2处溃疡伴炎症：4分；>2处溃疡和/或炎症>1cm：5分；溃疡和/或炎症>2cm，病变范围每增加1cm，分值加1。组织学损伤评分标准：①溃疡：无：0分；<3mm：1分；>3mm：2分。②炎症：无：0分；轻度：1分；重度：2分。③肉芽肿：无：0分；有：1分。④病变深度：无：0分；黏膜下层：1分；肌层：2分；浆膜层：3分。⑤纤维化；无：0分；轻度：1分；重度：2分。MP0活性测定方法：取远端结肠组织1块，每200mg加1ml 0.2％十六烷基三甲基溴化铵，匀浆、冻溶3次，离心(10min，2000r/rain)，取上清液0.1ml，以四甲基联苯胺为底物，用紫外分光光度计于波长655nm处测定5min内光密度(OD)变化均值，每分钟OD值变化1.0为1个酶活性单位。

(2)模型特点  模型小鼠于灌肠第2、第3日开始出现稀便及体质下降，便隐血试验阳性；黏膜病变以结肠末端为主。但也有达近端者，病变部位黏膜充血水肿，糜烂坏死，溃疡多发。坏死严重，肠腔狭窄；光镜下可见，黏膜上皮脱落、坏死，溃疡形成，部分溃疡达浆膜层，黏膜、黏膜下层以中性粒细胞浸润为主。模型大鼠灌肠后，1d时开始出现懒动、拱背、厌食、便次多、便质软或稀、末端有黏液或脓点等表现，3d后症状达高峰，体重明显下降，腹泻持续3周以上，体重回升在2周以后。灌肠后1～3周，模型大鼠结肠黏膜水肿、红斑、溃疡形成，炎症和溃疡位于距肛门8cm范围内，溃疡呈白色线状或灶性，周围黏膜增厚，结肠与周围组织粘连伴近端肠腔扩张，但未见穿孔；光镜下炎症可累及肠壁全层，主要表现为中性粒细胞浸润，亦可见数量不等的巨噬细胞和嗜酸性粒细胞，另可见增生的纤维母细胞，溃疡周围可见隐窝变形，有隐窝脓肿形成，横结肠和升结肠部位未见明显组织病理改变。4～8周，结肠大体形态逐渐恢复正常，溃疡已愈合；光镜下炎症改变仍然存在，表现为慢性炎症，可见正在愈合的溃疡；炎症主要位于黏膜及黏膜下层，可见淋巴细胞和浆细胞浸润，黏膜下小血管增生，结缔组织增生并纤维化。 MPO活性明显降低。

(3)比较医学  TNBS诱发溃疡性结肠炎动物模型的确切机制尚未阐明，可能为当将溶于乙醇的TNBS溶液注入结肠时，乙醇作为有机溶剂溶解了肠黏膜表面的黏液，破坏了肠黏膜屏障，使黏膜对肠腔内TNBS的通透性增高，由于肠道免疫系统不能将大量进入的TNBS彻底清除，导致后者与结肠上皮细胞的赖氨酸共价结合，从而改变了表面蛋白质，形成自身抗原，导致发生针对肠黏膜的一系列免疫反应。所以，TNBS与乙醇的联合使用对本模型的成功复制是至关重要的。通常情况下，TNBS用量为100～150mg/kg体重，浓度在50％以上的乙醇为4～5ml/kg体重。采用本方法复制的模型，动物结肠炎症和溃疡至少维持7～8周。其中，1～3周为急性期改变，以中性粒细胞浸润为主；4～8周为慢性炎症改变，浸润细胞主要为淋巴细胞和浆细胞。病理改变主要表现为结肠组织溃疡形成，肠壁增厚，黏膜及黏膜下层大量炎症细胞浸润，肉芽组织及隐窝脓肿形成。本模型采用的 MPO是近年来临床广泛采用的一种诊断指标。MPO主要位于多形核白细胞嗜苯胺蓝颗粒中，其在结肠中的活性与组织中性粒细胞浸润程度呈线性关系。在急性炎症期，肠壁主要为中性粒细胞浸润，故MPO活性增加；炎症向慢性转化后，则以淋巴细胞浸润为主，MPO活性即明显下降。MPO活性与结肠急性炎症的严重程度呈正相关，是评价肠道炎症急性期严重程度及鉴别急、慢性炎症的重要指标之一。