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实验方法

大鼠/小鼠望诊采集的方法与内容

2016年12月30日 浏览量: 评论(0) 来源:《大鼠、小鼠辨证论治实验方法学》 作者:方肇勤 主编 责任编辑:yjcadmin
摘要:大鼠/小鼠望诊采集的方法与内容

在大样本的大鼠/小鼠实验中,如100只以上的动物,在实验动物中心逐一仔细观察动物、记录,类似于临床望闻问切和书写脉案是不可行的。这样检测耗时过长,干扰实验动物,增加检测的误差,甚至遗漏大量四诊细节。

拍摄数码照片或录像可以大大缩短望诊时间,保证不同组别动物的检测条件一致。拍摄后回到实验室采用电脑,逐一仔细观察、对比、记录、书写脉案、辨证并制订治疗方案,是有效可行的办法;而且所获得的数据可以进一步开展图像分析,以及作为实验档案。这与临床有所区别,也是动物实验的优势所在。

(一)望诊采集的方法

1.普通望诊采集单元

(1)设备

大鼠/小鼠饲养笼具,绘制2.0cm×2.0cm标准方格的大鼠/小鼠站立的灰白色复合板(图3-1-1),NIKON Coolpix 4500数码相机、三脚架,3200K(色温)、

250W摄像专用光源,标准光源架,个人电脑等。

(2)方法

1)实验环境:实验动物中心邻近实验大鼠/小鼠饲养室的检测室,室温和光照与饲养室一致。检测场所一律采用人工照明,保证早晚不同时间的检测条件一致。下同。

2)安装三脚架和固定数码相机:将三脚架充分展开,将数码相机固定于三脚架上,保证每次拍摄的高度及焦距保持一致;部分照片可以直接手持相机拍摄,以取得最佳拍摄角度。

3)安装摄像专用光源、标准光源架,保证每次的拍摄条件一致。

4)常用的拍摄方法有3种:①将大鼠/小鼠移至2.0cm×2.0cm标准方格的复合板上,轻轻引导至所期望的体位,选择恰当的角度拍摄。②病变部位局部拍照。③一人将2个或2个以上不同组别大鼠/小鼠靠拢,将所期望观察的部位,如躯体、头面、吻部、胸腹、爪、尾等并列;另一人拍照。这样便于对照、比较和观察。

5)检测结束后,将数码相片输入电脑,仔细观察(必要时可局部放大仔细观察),记录与分析。

(3)注意事项

1)所有检测应在邻近饲养室的检测室进行,以免检测干扰饲养室内的其他动物。

2)不是以上所有3种检测方法在每一次检测中都要采用,可以选择符合实验目的的方法。

2.多维望诊采集单元

(1)设备

1)大鼠/小鼠固定器:根据不同日龄及体重的大鼠/小鼠制作不同规格的玻璃大鼠/小鼠固定器,用于其上、下、前、侧等四面表现的采集。将无色透明玻璃用硅酮玻璃胶粘成长方体形状。玻璃下板长,以便搁在支撑架上和承托大鼠/小鼠尾巴。

2)平面镜:主要用于反射大鼠/小鼠的背面、腹面及颜面到照相机镜头中,以便于采集大鼠/小鼠的四面外观特征信息。

3)望诊支撑架:主要用于装载大鼠/小鼠笼,固定平面镜,以便于数码相机的固定拍摄。支撑架漆成黑色,在中间,水平、前后各钉入两个长钉,用于搁置玻璃制大鼠/小鼠固定器;固定器的上、下、前缘固定平面镜,调整平面镜角度,令相机可以完整拍摄到大鼠/小鼠侧面、正面、背部和腹部4个角度(图3-1-2、图3-1-3)。

4)光源:3200K(色温)、500W摄影专用的光源2个。左侧为主光源,右侧为辅助光源。主光源距被拍摄体(如大鼠)440mm,并与被拍摄体在同一水平面上,辅光源距被拍摄体520mm。主光源、辅光源与被拍摄体成45°角。

5)数码相机固定台或三脚架:数码相机置于被拍摄体前方的固定架上,相机镜头距被摄体500mm,镜头正对大鼠/小鼠肩胛骨处,并与大鼠/小鼠同高。保证大鼠/小鼠的左侧面、颜面、背部、腹部四面外观像可以一次同时拍摄。

(2)方法

1)将大鼠/小鼠移至玻璃固定器,任其自由进入,并将玻璃固定器轻轻搁于望诊支撑架上,然后拍摄。

2)检测结束后,将相片拷贝入电脑,仔细观察(必要时可局部放大观察),记录与分析。

(3)注意事项

1)该设备检测的优点是一张数码相片中包含的信息量大。例如:图3-1-2中正常昆明种小鼠体态自如,双眼有神,被毛致密、顺滑洁净,爪尾吻部红润,有光泽;图3-1-3中荷瘤小鼠双目变暗,蜷缩,腋下可见较大的瘤体,瘤体下缘破溃,右前肢受到压迫畸形,毛色蓬松,吻部颜色偏淡暗,有脱肛及肛周炎症表现。单一角度拍摄的相片很难反映如此多的信息。

2)该检测的缺点是检测相对费时。

3)一旦拍摄中出现玻璃固定器污染,可以清水洗净,卷筒纸擦干后继续使用。

3.大鼠/小鼠自然活动望诊采集单元

设备、方法等同“旷场检测”,参见本章第二节。其与旷场检测的区别在于:①通常拍摄的是大鼠/小鼠在饲养笼具内的自然状态,而不是移入旷场后的状态。②检测目的不是旷场自主活动计数,而是观察大鼠/小鼠的体态、活动以及大量细致的望诊信息。

(二)望诊采集的内容

1.望全笼

(1)望垫料

打开笼盖,第一眼便能看到垫料。正常大鼠/小鼠的垫料干燥、洁净,粪便少。疾病后可见潮湿、秽浊、粪便或多或少。

(2)望大便

通过观察垫料、大鼠/小鼠提尾排便反应,以及观察肛门及周围等途径,可以观察其大便状况,涉及大便的干湿及程度、腹泻物的质地和颜色、便血和黑便等。

1)便秘与腹泻:便秘、便干、干结、秘结,大便多、大便不成形、偏湿、湿烂、腹泻、泄泻、腹泻如注、便溏、泻下清水、骜溏、完谷不化、下利清谷、黏腻不爽、黏液便、久泄、泄泻黏腻黄臭、便黏冻脓血(便以黏冻为主或便以脓血为主)、大便夹有脓血、大便夹黏液、下血污浊。

2)便血:大便夹血、便血、先便后血、先血后便、黑便、便血如注。

(3)望小便

通过观察垫料、抓持大鼠/小鼠时的排尿反应、采用代谢笼收集尿液等方式,可以观察其小便正常与否,涉及尿量多少、尿色等。

1)尿量:小便不利、尿少、尿量短、尿闭、小便失禁,尿多、小便量多、尿频、饮一溲一。

2)尿色:小便清长、小便色淡、黄、黄赤、赤、尿色如酱、尿血、尿脓血、尿血淡红。

3)其他:尿色混浊、尿浊、尿浊如膏脂、稍置后尿上有浮脂、尿砂石。

2.望形体寒热

(1)全笼或个体望诊

大鼠/小鼠的畏寒、喜暖、形寒、恶风,主要表现为蜷缩、扎堆、拱背、发抖。通过全笼观察、拍摄录像,以及抓持大鼠/小鼠,可以观察到其寒战与否。正常小鼠活跃好动、好探究,较大鼠活跃。患病后可见:蜷缩、扎堆、拱背、发抖、畏寒喜暖、畏寒、形寒、恶风、恶寒、振寒、寒战。

(2)红外成像检测(检测方法参见本章第二节)

畏寒与发热与体内、体表温度有关。采用红外成像检测技术,可以完整、准确地反映大鼠/小鼠体表不同部位的相对温度。针对不同疾病和证候的特点,探索最佳检测方法,可望观察到:寒热起伏、时寒时热、寒热往来、寒战壮热交替、背心恶寒、喜暖、身冷;发热、长期低热、低热、壮热、高热、身热不扬、身热起伏、潮热、午后潮热、日晡潮热、骨蒸潮热、入夜潮热,五心烦热、手足心热、升火、内热、汗出热不解、恶热;尾发凉、四肢厥冷、趾末不温、四肢欠温、足清、膝冷、腰足冷、下肢膝以下冷;关节红肿、灼热感等。

3.望形体虚实

全身的大致望诊是判断虚实的重要依据。着重观察健壮与否,是不是有消瘦、肌肉萎缩、赢瘦、大肉脱尽、骨立,肥胖,形体矮小、发育不良、发育不全等。

4.望皮肤、被毛

(1)被毛

正常大鼠/小鼠被毛稠密、润泽、贴身。疾病后可见被毛稀疏、脱落、蓬松、不荣、毛耸、竖立、无光泽、枯黄等。

(2)皮肤和肤色

裸鼠可以直接观察其皮肤。其他大鼠/小鼠虽躯体长有被毛,但在吻部、耳、尾、爪等处没有浓密的被毛,可以观察其皮肤和肤色。正常大鼠/小鼠肌肤饱满红润,疾病后可见肌肤疏松、色泽晦暗、色淡、泛青、泛红、发红、出血点、出血、肌衄、黄疸、肌肤甲错、皮肤瘀点、青筋暴露等。

(3)斑疹疮疡

人类常见的水痘、痘痕、斑、疹、斑色紫暗、斑色紫赤、斑块量多;皮肤破损渗出黄水、风疹块、皮肤红肿灼痛、痈、疽、疗、疖、漫肿、化脓、溃烂、腹股沟核块等,这些可能存在于特殊疾病的大鼠/小鼠身上。

(4)水肿

全身虚浮肿胀、轻度水肿、水肿、皮肤润泽光亮、腰以下肿盛、下肢水肿、足肿。

5.望呼吸

正常大鼠/小鼠呼吸平稳,疾病后可以发生呼吸的改变,如气急、咳喘等通过仔细的观察、抓持可以捕提到。包括:喘急、哮、气喘、呼吸加快、张口呼吸、气粗、肩息、气息窒塞;动则气急、短气、气短、少气、呼吸微弱;咳嗽、挠鼻等。

6.望神

(1)望形体、神、精力

1)精力旺盛与否。正常大鼠/小鼠可见骨骼粗壮、肌肉充实、被毛润泽。异常则可见疲惫、疲乏、容易疲劳、全身衰弱、倦怠、倦卧;乏力、四肢软弱无力、肢体困重、膝软、腰膝无力、不耐久行、不耐久立,甚至拱背、鸡胸、龟背。

2)神气充盈与否。正常大鼠/小鼠精神饱满,活跃、好探究。异常则可见神疲、少神、神情淡漠、倦怠、疲倦、神倦、精神萎靡、神情委顿、反应迟钝。

3)神志清晰与否。正常大鼠/小鼠神志清醒。异常则可见神不守舍、神思恍惚、神识模糊、神蒙、嗜卧、朦胧欲睡,嗜睡、昏睡、昏迷、昏厥、口吐唾沫、目合、口开、爪撤;猝然昏仆。

4)神志失常与否。正常大鼠/小鼠神志清晰。异常则可见神杲、痴杲;神志失常、狂躁不安、神错。

5)情绪平和与否。正常大鼠/小鼠温和而敏捷。异常则可见激动兴奋、易激动、烦躁、烦躁不安、急躁、易怒,多怒撕咬、躁动、焦虑、神思不宁、坐卧不安、坐卧不宁;抑郁、惊悸、神情不安。

(2)望眼神

正常大鼠/小鼠可见目光明亮、有神、正圆。异常则可见两目无神、眼裂变窄、眼眯、闭目、两目无光、眼中少神、无神或失神、瞳孔散大、目瞪、目陷,戴眼、两目斜视、两目歧视、两目直视。

(3)望运动步态

正常大鼠/小鼠活动便捷。异常则可见活动减少、少动、懒动、行动呆滞、步态不稳;站姿不稳、站立困难、头耸低垂、四肢无力、四肢痿软、身体痿软、四肢不用、肢体偏废、四肢不遂、瘫痪;僵硬;旋转时间改变。

(4)望睡眠

啮齿类动物大鼠/小鼠与人类不同,昼伏夜动,白天可以观察其睡眠状态,是否安稳,类似于询问患者是否存在多梦、失眠。

7.望筋脉、肝风或内风

(1)望筋脉

正常大鼠/小鼠筋脉舒展。异常则可见屈曲成团,四肢屈伸不利、项背牵强、项背强、行动不便、转侧不利、不能转侧;趾挛急、筋脉拘急、手足拘挛。

(2)望肝风或内风

角弓反张、痉厥、肢体强直;半身不遂、口眼歪斜、左侧口眼歪斜、右侧口眼歪斜、左侧半身不遂、右侧半身不遂、仆倒;癫、痫;战栗;头摇、唇颤动、撮口、颜面抽搐、筋惕、肉瞤、四肢蠕动、手抖、四肢震颤发抖、惕、颤、颤动、抽搐、全体振动、足颤、身振摇、步履不正、啮齿。

8.望爪、尾

大鼠/小鼠的爪可以肉眼直接望诊。观察内容涉及以下几点:

1)颜色:淡、淡红、偏红、红、红绛、紫、青紫、淡紫青、暗。

2)形质:胖、瘦、瘦瘪,有光泽、少光泽、无光泽,舒展、伸展、蜷缩,老、嫩,洁净、肮脏,爪甲脆薄、爪甲凹陷、爪甲不荣;以及尾根直径粗、细等。

3)洁净度:干净、污物附着。

4)疮疡:溃烂、结痂。

5)血脉是否存在瘀阻、颜色深浅、红紫等改变。

9.望头面

(1)望头面、吻部

1)颜色:正常大鼠/小鼠吻部颜色红润。异常则可见吻部色淡白、(白光)白、苍白,淡黄、黄、色黄而鲜明、色黄而晦暗、苍黄、萎黄,赤、潮红、颧红、升火、紫红、紫暗、紫褐、暗、暗红、灰、青灰、青紫、黑等。

2)质地:正常大鼠/小鼠吻部饱满。异常则可见少华、憔悴、色暗滞、枯槁无泽;吻部消瘦、燥、焦、萎、枯、荣、干裂;颜睑虚浮、颜脸肿大、面浮肿;疮、口糜、口疳、红肿、生痞等。

3)中风:口角流涎、撮口、口开不闭。

4)其他:吻部血痕、咯血,不洁;张口抬肩。

(2)望齿

正常大鼠/小鼠门齿光洁、牙龈红润。异常则可见牙龈淡白、龈浮、牙龈红肿、牙龈糜烂、牙龈肿痛、牙龈萎缩、牙龈出血、牙宣、齿衄;牙齿干燥、齿干燥如枯骨、齿松、齿稀疏、齿根外露;或可见牙关紧闭。

(3)望鼻

正常大鼠/小鼠鼻端饱满、淡红。异常则可见挠鼻、鼻孔血痕、鼻衄;鼻流清涕、浊涕、脓涕,黄涕、腥臭涕、稠涕、鼻涕量多;息肉,枯槁。

(4)望目

正常大鼠/小鼠双目鲜红、透明,眼睑淡红。异常则可见目赤、黯淡、目赤肿痛,眼胞红肿、目巢浮肿,流泪、羞明、目眦赤烂、眵多黄浊,眼突,闭目,眼睑和眼角出血点和瘀斑,失明。

(5)望耳

正常大鼠/小鼠双耳淡红。异常则可见色淡、暗红、形小、耳薄干枯、耳轮枯焦、干枯焦黑;红肿、肿;耳道流脓等。

10.望胸腹、二阴

(1)望胸腹

据报道,一些疾病模型大鼠/小鼠可见乳房肿块、腹胀满、腹胀大、腹部癓瘕;轻度腹水、腹水、臌胀等。

(2)望二阴

异常可见脱肛、肛门红肿充血;粪便黏滞在肛门周围、污秽;直肠脱垂;阴下湿冷、阴囊湿疹,阴囊红肿、重坠,阴囊水肿如水晶状、阴囊肿大、阴囊肿硬,阴囊收缩、阴缩等。

11.舌、爪、尾的显微望诊

正常大鼠/小鼠舌体饱满、舒展,色淡红而明润;爪体饱满、舒展,伸展有力,色红润有光泽,干净无污物附着;尾直径粗大、饱满,角化质呈鳞片状、完整,排列整齐,色淡红,干净无污物附着。C57小鼠爪背边缘可见黑褐色被毛;尾色暗而有光泽;而裸鼠爪背边缘则少被毛。

(1)舌、爪、尾的共同望诊

1)颜色:淡、偏淡、淡红、偏红、红、红绛、紫红、青紫、淡紫青、暗红,及其组合,如淡紫;以及出血点、瘀斑等。

2)胖瘦:瘦、偏瘦、正常、偏胖、胖。

3)光泽:有光泽、少光泽、透明、明润。

4)伸展:有力、无力。

5)舒展:自如、差,强直,蜷缩。

6)大小:正常、瘦薄、瘦瘪、胖、肿胀。

7)老嫩:正常、较苍老、苍老、嫩。

8)血脉:清晰、粗细,以及颜色的深浅改变。

9)洁净:干净、有污物附着。

10)溃烂:溃烂、结痂。

(2)舌的特殊望诊

1)舌体:强硬、痿软、歪斜、短缩、卷短。

2)津液:润、滑、少津、干、燥、糙。

3)舌面:黏膜萎缩、镜面舌;丝状乳头突起、芒刺、红点、杨梅舌,裂纹,舌衄。

(3)爪、甲的特殊望诊

1)脆薄、断裂、爪甲不荣。

2)垫料、污物、粪便附着。

3)肉垫溃烂、肿胀、塌陷等。

(4)尾的特殊望诊

1)尾径粗细。

2)鳞片状角化质的色泽、形态。

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