免疫诱导法建立复发性口腔溃疡动物模型
【造模机制】复发性口腔溃疡的病因与多种因素有关,但其中免疫系统异常是一个非常重要的因素,有研究认为复发性口腔溃疡多属于自身免疫性疾病。因此,免疫诱导法建立复发性口腔溃疡动物模型正是采用了自身免疫反应原理。
【造模方法】免疫诱导法多选用健康新西兰兔(体重2kg左右)作为实验动物。具体建模步骤主要包括:
1.抗原制备 取健康新西兰兔4只,安乐死。取头部,在超净工作台中操作,沿口腔颊部剪开,用灭菌生理盐水冲洗3次,然后于口腔黏膜下注射生理盐水,用灭菌手术器械(手术剪和手术钳)剥离黏膜,置灭菌培养皿中,用灭菌生理盐水冲洗3次,灭菌滤纸吸干水分,剪碎,称重,置玻璃匀浆瓶中,加入10倍量的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4),1200r/min匀浆20分钟,倒入灭菌离心管中超声处理15分钟,8000r/min于0℃冷冻离心15分钟,取上清液,双缩脲法测蛋白含量后,用磷酸缓冲液调节蛋白含量为8.0mg/ml,用15ml灭菌玻璃瓶分装,得口腔黏膜匀浆。-70℃冷冻保存备用。
2.乳化 在免疫动物时,取口腔黏膜匀浆适量,融化后加等量的完全弗氏佐剂,用注射器将两者充分混匀,呈乳状液。滴一滴于水面上,若仍保持为滴状不散开,则可应用。
3.免疫注射 免疫动物前先将实验用新西兰兔背部脱毛,常规消毒,无菌条件下沿脊柱二侧皮内注射抗原乳化液1ml,共20个点,每隔2周注射1次,共行5次注射。一般在第3次注射后出现口腔病损。
【模型特点】该动物模型口腔溃疡2~3天愈合后会反复发作,与人类复发性口腔溃疡较为相似,更接近临床。
【模型评估和应用】该方法建立复发性口腔溃疡动物模型更接近临床,但这种方法伤害性较大。造模动物常选用新西兰兔,但也可以选用大鼠、豚鼠、小鼠、金黄地鼠等,不同动物免疫时所使用的抗原乳化液剂量有所不同。此模型适用于复发性口腔溃疡的病因及治疗研究、提高免疫功能的抗口腔溃疡药物研究以及防治化疗过程中口腔溃疡药物的研究等。用免疫诱导口腔溃疡动物模型更接近临床,但不适合单纯性口腔溃疡;如果是研究炎症引起的口腔溃疡,用豚鼠的创伤性口腔溃疡动物模型较为适合。对于研究感染引起的口腔溃疡则用细菌感染诱导的口腔溃疡动物模型。
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