实验方法
兔的体外受精技术
2015年03月20日
来源：《实验动物管理与实用技术手册》
作者：徐国景 易工城 唐利军 孔利佳
责任编辑：lmjinfo
( 一 ) 卵母细胞的收集
按本章第二节所述的方法对母兔进行超数排卵处理,HCG注射后13～15h 收集卵母细胞。刚排出的卵母细胞,外包有多层致密的卵丘细胞。兔卵直径(包括透明带)170µm左右,在输卵管内停留时间,外面又会包上一层胶膜,使直径可达 350µm。
( 二 ) 精子采集与获能
精子采集方法有两种:一是从交配后母兔子宫中回收精子。回收精子时,将注射针自子宫体插入,向子宫角注入2～4ml培养液(KRB)。之后, 再吸困液体。交配后12～2Oh 回收的精子均已获能,可得到较高且稳定的受精率。
二是假阴道法采集兔精子。将收集的精子在mHIS中处理15min,再用 mDM 培养 2-4h;或用 HIS处理15min,并在DM 液中培养1～2h,均可获得较好的受精率和发育率。
( 三 ) 受精
受精液为 DM 或 mDM,pH 值为7.8。将洗涤数次的卵母细胞加入到含精子密度为(2～8)×105/m1 的受精液中,于 38℃,5%C02 培养箱中培养。培养3h,精子穿入卵中。在精卵作用6～7h后,将卵移入含有20%灭活兔血清的DM 或 mDM 中继续培养,观察受精卵发育情况。发育到 2～4 细胞胚时,将其移入含1.5%BSA 的Ham F-10 液继续培养,或直接移植于同期发情的受体母兔中。
