1.目的

      检测实验动物生活环境。主要包括饲料、垫料、饮水等卫生状况，判断微生物污染程度。

      规范霉菌和酵母菌检验的基本原则、技术要求和方法。

    2.内容

    2.1设备材料

    2.1.1冰箱：0～4。

    2.1.2 霉菌恒温培养箱：25℃～28℃。

    2.1.3恒温振荡器。

    2.1.4显微镜：10×～100×。

    2.1.5架盘药物天平：0g～500g，精确至0.5g。

    2.1.6灭菌具玻塞锥形瓶：300ml。

    2.1.7灭菌广口瓶：500ml。

    2.1.8灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml（具0.1ml刻度）。

    2.1.9灭菌平皿：直径90mm。

    2.1.10灭菌试管：16mm×160mm。

    2.1.11玻片、盖玻片

    2.1.12灭菌牛皮纸袋、塑料袋。

    2.1.13灭菌金属勺、刀等。

    2.2培养基和试剂（见霉菌和酵母菌检验试剂及配制的标准操作程序）

    2.2.1马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA)

    2.2.2孟加拉红培养基

    2.3 操作步骤

    2.3.1 以无菌操作称取固体样品25g或液体样品25ml,放入含225ml灭菌水具玻塞锥形瓶中，振摇30min，即为1:10稀释度。

    2.3.2 用灭菌吸管吸取1:10样品稀释液10ml，注入灭菌试管中，另用1ml灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。

    2.3.3 取1ml 1:10样品稀释液注入含有9ml灭菌水的试管中，另换一支1ml灭菌吸管吹吸五次，此液为1：100稀释液。

    2.3.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，然后将晾至45℃左右的培养基注入平皿使之与样品稀释液混匀，待琼脂凝固后，倒置于25℃～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。

    2.3.5 计算方法通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中所含霉菌和酵母数。稀释度选择及菌落报告方式可参考菌落总数检验SOP。

    2.3.6报告:每克(或毫升)样品所含霉菌和酵母数以cfu/g(ml)表示。

    2.4 霉菌直接镱检计数法

        常用的为郝氏霉菌计测法。

    2.4.1设备和材料

    2.4.1.1折光仪。

    2.4.1.2郝氏计测玻片；具有标准计测室的特制玻片。

    2.4.1.3盖玻片。

    2.4.1.4测微器:具标准刻度的玻片。

    2.4.2操作步骤

    2.4.2.1检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为1.344～1.3460(即浓度为7.9%～8.8%),备用。

    2.4.2.2显微镜标准视野的校正:将显微镜按放率90倍～125倍调节标准视野,使其直径为1.382mm。

    2.4.2.3涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察。

    2.4.2.4观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察50个视野,同一检样应由两人进行观察。

    2.4.3结果与计算:在标准视野下,发现有霉菌丝其长度超过标准视野(1.382mm)的六分之一或三根菌丝总长度超过标准视野的六分之一(即测微器的一格)时即为阳性(+).否则为阴性(-),按100个视野,其中发现有霉菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数。