一、技术：
保定的定义，是指使用手或以器械对动物个体之活动作部分或完全之限制，以便进行检查、采样、投药、治疗或进行实验操作等之手段而言。保定无疑是进行所有动物实验前的基本步骤，但在进行实验的过程中也需避免使动物产生不必要的伤害，以下为进行实验动物保定时之重要须知：
(一) 不可将保定装置视为正常之饲养方式。
(二) 不可紧紧为处理或控制上图方便，而恣意使用保定装置。
(三) 在可完成实验目的为前提下，需尽量缩短保定之时间。
(四) 在进行保定之前，应训练动物去适应保定设备与进行保定的人员，保定人员也应预先熟练保定相关之技术。
(五) 保定期间若动物有受伤或不适之情形时，则应将动物暂时性或永久性移离保定装置，并进行必要之治疗。

二、小鼠的保定与抓取
(一)小鼠的抓取，可以拇指与食指轻挟小鼠的尾巴后提起。如果将小鼠半悬空于PC盒铁盖上，则小鼠会自然地以前肢抓紧铁盖，如此可以进行皮下注射或阴道冲洗抹片等操作。

(二)如需强制性较高之操作，可用右手抓住小鼠尾巴，以左手拇指及食指抓其颈背部皮肤，使小鼠仰卧于无名指和中指间，再以小指与无名指夹住小鼠尾巴。
(三)小鼠保定器（左图）

三、小鼠的采血：
采血对非专职实验动物从业人员而言，是一门难度颇高的技术。采血的技术只能靠熟能生巧与细心的摸索正确的手感来精进。

采血会造成实验动物较严重的紧迫，因此建议给予适当的麻醉或镇静，可以有助于采血过程的顺畅。

成年小鼠的总血量是1.6至3.2 ml，单次采血的建议量为0.2至0.3 ml，放血可得之总血量是1至1.5 ml。少量采血时可以使用眼角采血及尾巴采血，大量采血则采用心脏采血。

心脏采血之困难度较高，且需牺牲动物。除非将动物牺牲，否则所有的采血法皆需确认动物的伤口以完全止血不在出血后，才可将动物放回PC笼内。

(一)尾巴采血：
动物如不麻醉则需以保定器保定。将尾巴置于40℃温水中5至10分钟，使尾巴血管扩张，使用25至30 G的针头由尾巴左右两侧之尾静脉或腹侧的尾动脉下针抽血，或仅以25至30 G的针头插入尾动脉中，确认有血液流出后再以离心管承接。

(二)隐静脉（Saphenous vein）采血:
将动物徒手保定或者将动物塞进适当直径与长度的透明塑料管，藉由固定且紧绷小鼠大腿与尾巴之间的皮肤来伸直其大腿，剔除大腿外侧之皮毛，即可在踝关节的上下端见到隐静脉，将剃毛部位以酒精消毒。

以23 G的针头刺开隐静脉，以毛细管收集流出之血液，采得足够之血量后将动物的后脚弯曲以减少开创部位的血流量，再将毛细管内的血液送入微量离心管，最后再以灭菌棉花直接加压开创部位以止血。经过24小时候相同部位可以继续采血。

(三)斩首采血法：
此法取得之血液因可能会受动物的其它体液污染。将小鼠摇晃或麻醉使其无法动弹，再以强力的剪刀或断头器将动物斩首后迅速以容器装盛。

(三)眼角采血：
可麻醉或徒手保定。采血时可视需要选择有或无抗凝剂处理之毛细管或巴士德吸管。以毛细管由眼窝前端边旋转边向、向后插入眼窝内静脉丛，待毛细管可见出血时，倾斜毛细管，使血液流入毛细管中。采血时间尽量缩短以避免凝血，采血后需注意止血。采血过程不可过于粗暴而伤及眼球或哈氏腺。

(四)心脏采血：
动物需经安乐死或麻醉后才可进行心脏采血，采血结束也需将动物安乐死。将动物仰卧置于台面，下针的位置位于剑状软骨突下方，约与腹部呈15至30度角向胸腔缓缓推入，一发现有血液流入针筒，即固定针头开始缓慢抽血。

四、胃管灌注
胃管灌注能使药剂经胃管直接投入胃中，进行胃管灌注时不可使用一般的针头，需使用经处理过的球型针头，可避免对动物造成伤害。插入之前需先测量动物由口腔至胃的距离选用适当长度的胃管，以避免插入胃管时插入过深造成动物胃的伤害，或是插入过浅使灌注物无法达到胃部。以注射针筒吸取药物，再保定动物，将胃管球型头置入动物口腔中，经喉背滑入食道到达胃内部，如果在插入过程遇到阻碍，需立即拔出，重新再插入，胃管插入胃后，迅即注射，注射完立刻拔出胃管。胃管灌注建议的最大灌注量为20 ml/kg。
五、注射
小鼠注射建议使用大于23 G的针头，且尽量使用较短的注射针。
(一)肌肉注射：
小鼠不适合肌肉注射给药，请选择其它给药方式。小鼠的肌肉层都很浅薄，肌肉注射会造成小鼠不适或肌肉坏死。
(二)皮下注射：
事先以注射针筒吸取欲注射的剂量。保定动物，注射部位颈部上方皮肤需以酒精消毒。以拇指与食指将颈部上方皮肤拧起，以针头插入皮肤拧起后产生之凹陷处，试着回抽针筒，如有血液或液体回流，表示不适当，需重新插入。确定插入正确位置后，缓缓将药剂推入。皮下注射建议的最大注射量为20 ml/kg，可分成2至3处区域注射。
(三)腹腔内注射：
事先以注射针筒吸取欲注射的剂量。保定动物，头部朝下腹部朝上，注射针头以30度角插入腹中线右侧。试着回抽针筒，如有血液或液体回流，表示不适当，需重新插入。缓缓将药剂推入。腹腔内注射建议的最大注射量为20 ml/kg。
(四)静脉注射：
小鼠一般静脉注射区域有二，一为尾根部左右侧之静脉，另一为直接由眼球周围注入眼窝之静脉丛。将小鼠尾巴置于40℃温水中或以加热灯照射5至10分钟，使尾巴血管扩张。保定方式可以使用保定架，或将小鼠尾巴穿过PC盒铁盖之铁丝间隙，一手拉直尾巴。以酒精消毒后，针头与尾巴呈20至30度角下针，下针时针尖斜面朝上，针尖进入静脉时会有一瞬间通畅的感觉，若仅插入皮下则会持续感到针尖受阻。
由眼窝血管丛注射时，可先麻醉动物，以拇指、食指及中指捏挤小鼠头颈部皮肤，使小鼠眼球突出眼窝，而由突出之眼球周缘-固定眼球之肌肉处，向眼球之底侧下针约2至3 mm深，即可注入。注射应徐缓，勿刺入眼球，注射时应徐缓，若药剂露出，可利用另一侧之眼窝，保定时勿将小鼠颈部捏的太紧或太久，以避免小鼠窒息死亡。
建议的静脉最大注射量为20 ml/kg。
六、粪便与尿液的收集
(一)代谢笼：以代谢笼单独饲养动物，代谢笼可以定量动物每日摄食之食物与饮水量，又因其能将粪尿分离，所以也能定量每日动物之排份与排尿量。
(二)直接采集：小型囓齿类动物通常在有人接触时，就会因惊吓而排便或分泌尿液，故可在保定时，同时采集尿液与粪便。
(三)导尿管：雄性之天竺鼠或兔子可以使用外径0.5 mm的导尿管收集尿液，但除非非常了解这些动物的泌尿生殖解剖构造，某则很难应用于同种之雌性动物。